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一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細胞暴露于受試物一定時間,然后將細胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細胞對（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的,核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落。基于突變集落數(shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。

應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養(yǎng):

選擇合適細胞系（如L5178Y、CHO），常規(guī)傳代培養(yǎng)

2）受試物處理:

暴露于不同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠時間（通常7-10天）使突變表型顯現(xiàn)。

4.）突變體篩選:

TK試驗:使用（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成分析:

計數(shù)突變集落，計算突變頻率（突變集落數(shù)/存活細胞數(shù)）

6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計:

與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內(nèi)代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。

4）合規(guī)性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。